背景介紹
促紅細(xì)胞生成素(Erythropoietin,EPO)是一種糖蛋白,絕大部分由腎臟產(chǎn)生,主要功能是促進(jìn)紅細(xì)胞的生成,提高機(jī)體血紅蛋白的濃度,臨床上主要用于治療腎性貧血和腫瘤等各種慢性疾病所伴發(fā)的貧血。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),EPOR還廣泛表達(dá)于人體內(nèi)的非造血組織,它們與EPO結(jié)合發(fā)揮器官保護(hù)、免疫調(diào)理、抗炎等多種非造血作用,所以EPO被認(rèn)為是一種多效性作用的細(xì)胞因子。EPO是迄今所知作用單一且安全可靠的升血紅蛋白制劑。EPO的應(yīng)用能有效改善腎性貧血患者生活質(zhì)量,減少輸血次數(shù),甚至不輸血,降低心血管等并發(fā)癥的發(fā)生率。
EPO分子骨架為165個(gè)氨基酸組成的肽鏈,具有3個(gè)N端連接的糖基化位點(diǎn)和1個(gè)O端連接的糖基化位點(diǎn),糖鏈占蛋白總分子質(zhì)量的40%,是一種高度糖基化的蛋白。唾液酸分布于糖鏈末端,作為EPO的主要活性成分之一,唾液酸含量的多少對(duì)EPO體內(nèi)生物學(xué)活性的高低起決定性作用。EPO蛋白唾液酸化修飾程度的差異會(huì)導(dǎo)致所帶電荷的差異,EPO蛋白不同唾液酸化修飾組分的分析檢測(cè)也就是對(duì)其不同電荷異質(zhì)體組分的分析檢測(cè)。
傳統(tǒng)電荷異質(zhì)體的分析手段主要依靠平板等電聚焦電泳(IEF),通過(guò)等電點(diǎn)差異對(duì)電荷異質(zhì)體進(jìn)行分離,唾液酸化程度較高的組分相對(duì)等電點(diǎn)較低。然而這種方法只能對(duì)不同組分進(jìn)行定性分析,難以對(duì)各個(gè)組分的相對(duì)百分含量進(jìn)行分析,使用范圍十分局限。隨著蛋白分析手段的不斷進(jìn)步和發(fā)展,基于毛細(xì)管電泳分析技術(shù)的毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)以其快速、高效、準(zhǔn)確的分析特點(diǎn)逐步被應(yīng)用于蛋白的電荷異質(zhì)體分析。
本方法主要采用CAPEL-205高效毛細(xì)管電泳儀,基于毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行EPO蛋白不同唾液酸化程度的電荷異質(zhì)體的檢測(cè),參照的是歐洲藥典1316(Identification, method B. Capillary zone electrophoresis) 中的方法。
測(cè)試條件
BGE:按照歐洲藥典1316的條件
毛細(xì)管電泳: Leff/ Ltot = 102/112 cm,ID= 50 µm
樣品進(jìn)樣: 1000 mbar ,5s
電壓: +16 kV
溫度: 35℃
檢測(cè)波長(zhǎng): 214nm
樣品: 用于物理化學(xué)測(cè)試的促紅細(xì)胞生成素的電荷異質(zhì)體
CRS 1-8-EPO
圖1 檢測(cè)色譜圖
結(jié)論
采用CAPEL-205高效毛細(xì)管電泳儀,基于毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行EPO蛋白不同唾液酸化程度的電荷異質(zhì)體的檢測(cè),可以實(shí)現(xiàn)EPD電荷異質(zhì)體的有效分離,方法準(zhǔn)確、靈敏度高、重現(xiàn)性好,可以滿足藥品實(shí)驗(yàn)室日常分析及研究要求。
配置列表
儀器配置 | CAPEL-205毛細(xì)管電泳系統(tǒng),裝有WINDOWS®XP/ 7/8/10操作系統(tǒng)的筆記本電腦 |
ELFORUN軟件工作站 |
Capel-205毛細(xì)管電泳儀的優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)
通過(guò)施加高壓電場(chǎng),基于毛細(xì)管液體樣本組成成分遷移速度的差別。應(yīng)用UV吸收檢測(cè)技術(shù),在毛細(xì)管出口應(yīng)用高精度光學(xué)系統(tǒng)定量檢測(cè)分離出的組分
光源:高強(qiáng)度氘燈,優(yōu)化光學(xué)設(shè)計(jì)保證低檢出限
可實(shí)現(xiàn)多種不同分析方法和分離模式,毛細(xì)管區(qū)帶電泳,毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜,毛細(xì)管等電聚集,毛細(xì)管凝膠電泳,毛細(xì)管等速電泳
全自動(dòng)進(jìn)樣,進(jìn)樣方式可選電動(dòng)及壓力進(jìn)樣。壓力進(jìn)樣,步進(jìn)值1mbar,*高99mbar;電動(dòng)進(jìn)樣,電壓范圍:步進(jìn)值1kV,1-25kV可調(diào)
毛細(xì)管冷卻:恒溫水冷系統(tǒng),環(huán)境溫度5-50℃可調(diào);恒溫水冷保證溫度控制更加精細(xì)和準(zhǔn)確,提高分析效果(相對(duì)與風(fēng)冷,冷卻效果更優(yōu)/與液冷相比,成本更低)
標(biāo)準(zhǔn)離心管1.5mL(Eppendorf型)適用于所有樣本分析
擴(kuò)展的全自動(dòng)進(jìn)樣器,高達(dá)59個(gè)進(jìn)樣位,允許提供自動(dòng)過(guò)夜分析功能
*全自動(dòng)開(kāi)口進(jìn)樣設(shè)計(jì),避免揮發(fā)和交叉污染
新型高壓模塊提供±30kV壓力,保證超優(yōu)的分析效率和快速分析時(shí)間
采用流動(dòng)電位控制技術(shù),極大提高重現(xiàn)性,尤其是分析復(fù)雜樣品更具優(yōu)勢(shì)
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